采用重叠延伸PCR法，在单管中将rpoB、embB、katG基因和inhA启动子的四个耐药相关片段连接扩增为一个400至600 bp长的融合片段，并只需一次测序反应得到四个片段的耐药突变信息，从而获知某结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇这三种一线抗结核药的耐药情况。与培养法药敏试验、GeneXpert和熔解曲线法对比验证结果的可靠性，为临床上推广应用提供实验依据。该方法在临床上推广应用将极大地降低检测成本，减轻患者经济负担并产生良好的社会效益。